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當前位置:首頁技術文章polyplus-transfection FectoPRO說明書

polyplus-transfection FectoPRO說明書

更新時間:2021-06-03點擊次數(shù):6488

polyplus-transfection FectoPRO說明書

 

蛋白質(zhì)和 mAb 生產(chǎn)
懸浮液 CHO 和 HEK-293 的高產(chǎn)率

FectoPRO ®

驚人的蛋白質(zhì)和抗體產(chǎn)量

使用較少的質(zhì)粒 DNA 進行經(jīng)濟高效的瞬時基因表達

  • 與各種哺乳動物表達培養(yǎng)基和細胞系統(tǒng)兼容
  • 符合生物制造指南
  • 適應高密度細胞系統(tǒng)
  • 化學定義且不含動物源性成分

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概述

規(guī)格

試劑

FectoPRO ®

分子交付

脫氧核糖核酸

應用

生物生產(chǎn)

細胞類型

懸浮液 CHO、HEK-293 和衍生物

轉染次數(shù)

1 mL FectoPRO ®足以將 800 mL 的細胞培養(yǎng)物轉染超過 1 L

貯存

5°C ± 3°C,如果儲存得當,自生產(chǎn)之日起可穩(wěn)定 3 年

提供

FectoPRO ®助推器


概括

使用瞬時轉染和基因表達實現(xiàn)蛋白質(zhì)產(chǎn)量。

FectoPRO轉染試劑專為使用低 DNA 量(< 1 µg/ml 細胞培養(yǎng)物)在各種無血清培養(yǎng)基中的懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中增強瞬時基因表達 (TGE)而設計。

FectoPRO® 介導的轉染過程可以輕松地從幾毫升細胞培養(yǎng)物擴展到幾升細胞培養(yǎng)物,確保強大的可重復蛋白質(zhì)生產(chǎn)。更高的生產(chǎn)力和低 DNA 量要求使 FectoPRO® 成為生物生產(chǎn)過程的經(jīng)濟高效的解決方案。

 

訂購信息

參考編號產(chǎn)品轉染試劑表達助推器表達培養(yǎng)基
116-001FectoPRO® 試劑1 毫升1 毫升——
116-010FectoPRO® 試劑10 毫升10 毫升——
116-100FectoPRO® 試劑100 毫升100 毫升——
716-06LFectoCHO® CD 培養(yǎng)基————6 x 1 升
716-01LKITFectoCHO® 表達系統(tǒng)1 毫升1 毫升1升

 

描述

驚人的蛋白質(zhì)產(chǎn)量

FectoPRO ®在無血清培養(yǎng)基中懸浮生長的 CHO 和 HEK-293 細胞中實現(xiàn)了驚人的高蛋白質(zhì)和抗體產(chǎn)量(圖 1)。

圖 1. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中產(chǎn)生驚人的抗體產(chǎn)量。將細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基中,并按照各自推薦的方案用 FectoPRO ® (0.8 µg DNA/ml) 或 FreeStyle™ MAX 試劑 (1.25 µg DNA/ml)轉染試劑。使用蛋白 G 生物傳感器(fortéBIO ®octet RED96 系統(tǒng))在轉染后 1 至 6 天測定重組小鼠 IgG 的產(chǎn)量FreeStyle™ 是 Life Technologies™ Corporation 的商標。數(shù)據(jù)由 ProteoGenix SAS(法國)友情提供。

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在轉染效率方面,FectoPRO ®在很大程度上優(yōu)于其他轉染試劑,例如生物生產(chǎn)過程中常用的線性 PEI(圖 2),從而導致更高的蛋白質(zhì)產(chǎn)量(圖 3)。

FectoPRO - 顯微鏡

圖 2. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中提供高轉染效率將 FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基中,并使用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX Reagent 使用 0.4 µg/ml 和 1.25 µg/ml分別是 GFP 表達質(zhì)粒。使用熒光顯微鏡在轉染后 24 小時測定 GFP 表達。

圖 3. FectoPRO ®在懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中提供了蛋白質(zhì)產(chǎn)量。FreeStyle™ CHO-S 和 HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ CHO 或 293 表達培養(yǎng)基中,并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.4 µg DNA/ml)、FreeStyle™轉染MAX Reagent (1.25 µg DNA/ml) 或 PEIpro ® (1 µg DNA/ml) 遵循各自試劑的推薦方案。在轉染后 72 小時(CHO 細胞)和 120 小時(HEK-293 細胞),通過蛋白 G 親和定量 (HPLC) 和蛋白質(zhì)印跡分析 IgG3-Fc (34 kDa) 的產(chǎn)生。標準品對應于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。

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成本效益:使用低質(zhì)粒 DNA 量

高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA 制備可能非常昂貴,尤其是當大規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)需要大量 DNA 和許多質(zhì)粒時。FectoPRO ®使用 0.4 至 0.6 µg DNA / 10 6細胞 / ml 細胞培養(yǎng)物可節(jié)省 40 至 60% 的 DNA 成本;因此使該套件成為生物生產(chǎn)過程的經(jīng)濟實惠的解決方案。

表 1.根據(jù)制造商的建議,用于轉染的 DNA 量和試劑量(FectoPRO ®和競爭對手)。

持續(xù)的蛋白質(zhì)生產(chǎn)

蛋白質(zhì)生產(chǎn)過程的持續(xù)時間在過去幾年有所增加,現(xiàn)在大多數(shù)蛋白質(zhì)生產(chǎn)過程持續(xù) 1-2 周以獲得最佳蛋白質(zhì)生產(chǎn)量。FectoPRO ® 的開發(fā)旨在確保持續(xù)數(shù)天的蛋白質(zhì)生產(chǎn),同時保持高細胞活力以實現(xiàn)更持久的蛋白質(zhì)生產(chǎn)(圖 4)。

圖 4. FectoPRO ®在懸浮細胞中提供持續(xù)的蛋白質(zhì)生產(chǎn)FreeStyle™ HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ 293 表達培養(yǎng)基中,并按照標準方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉染。在不同時間點后通過蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。使用 FreeStyle™ CHO-S 獲得了類似的結果(數(shù)據(jù)未顯示)。

易于擴展

使用可輕松適應各種培養(yǎng)容器的強大方案簡化您的生物生產(chǎn)過程。FectoPRO ®介導的轉染可以從 30 毫升線性擴展到升細胞培養(yǎng)物,無需修改方案(圖 5)。

 

圖 5. FectoPRO ®在 CHO 細胞中易于擴展和重現(xiàn)FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個細胞/ml接種在 30 ml、100 ml、300 ml 或 1 L FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基中,并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉染在第 1 天至第 6 天,使用臺盼藍排除測定法測定細胞活力,并通過蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 和蛋白質(zhì)印跡法測定 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。標準品對應于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。

可重復的生產(chǎn)產(chǎn)量

FectoPRO ®是使用高度受控的生產(chǎn)過程制造和配制的。這確保了從實驗到實驗的高度可重復的結果。此外,為了滿足當前的監(jiān)管指南,F(xiàn)ectoPRO ®發(fā)布時采用了先進的質(zhì)量控制,包括蛋白質(zhì)生產(chǎn)力規(guī)范,以保證批次間的出色一致性(圖 6)。

圖 6. FectoPRO ®具有出色的批次間重現(xiàn)性懸浮CHO細胞以1 x 10 6細胞/ml接種在30ml CHO培養(yǎng)基中,并按照標準方案使用3個不同批次的FectoPRO ® (CCIII 078、CCIII 104或CCIII 106)進行轉染。轉染后 72 小時,通過蛋白 G 親和力定量分析 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。在懸浮的 HEK-293 細胞上獲得了類似的結果(數(shù)據(jù)未顯示)。

與哺乳動物表達系統(tǒng)兼容

與其他市售試劑不同,F(xiàn)ectoPRO ®轉染試劑盒適用于 CHO 和 HEK-293 細胞(圖 2 和 3)。該試劑兼容多種培養(yǎng)基配方;因此,實驗室實施簡單明了(圖 7,表 2)。

圖 7. FectoPRO ®在不同培養(yǎng)基中生長的懸浮 CHO 細胞中提供了蛋白質(zhì)產(chǎn)量。將 CHO 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基、CD CHO 培養(yǎng)基或 Pro-CHO™ 4 培養(yǎng)基中,并按照推薦的方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX 試劑轉染各自的試劑。在轉染后 72 小時通過蛋白 G 親和定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產(chǎn)生。

FectoPRO - 表培養(yǎng)基 CHO

表 2.在不同培養(yǎng)基中使用 FectoPRO ®培養(yǎng) CHO 細胞的蛋白質(zhì)產(chǎn)量。

FectoPRO - 表媒體 HEK

表 3. HEK-293 細胞在不同培養(yǎng)基中使用 FectoPRO ® 的蛋白質(zhì)產(chǎn)量

探索我們專用于 CHO 細胞的試劑盒:FectoCHO ®表達系統(tǒng)

FreeStyle TM、CD FortiCHO TM、CD OptiCHO TM、Expi293 TM、ExpiCHO TM和CD293 是Gibco ® 的商標。
Pro-CHO TM、PowerCHO TM和 Pro293 TM是 Lonza TM Group 的商標。
HyClone TM、HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM 的商標。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商標TM

 

瞬時蛋白質(zhì)生產(chǎn)

蛋白質(zhì)生產(chǎn)包括在細胞系中以小/中到大規(guī)模過表達重組蛋白質(zhì)或肽。產(chǎn)生的生物分子可用于研究目的,如結構表征,一直到治療或醫(yī)學應用。

 

 

FectoPRO ®符合生物制造指南。事實上,F(xiàn)ectoPRO ®保證不含動物源成分,并且是化學成分確定的。對生產(chǎn)的每個批次進行系統(tǒng)的批次管理和放行測試。此外,F(xiàn)ectoPRO ®轉染試劑盒經(jīng)過先進的質(zhì)量控制:蛋白質(zhì)生產(chǎn)力、細胞活力和*無菌。

此外,Polyplus-transfection ®自 2002 年起獲得 ISO 9001 質(zhì)量管理體系認證;這一級別的認證向全球客戶保證,供應商已為產(chǎn)品開發(fā)、制造、銷售和客戶支持建立了可靠且有效的流程。

 

 

 

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